一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過程中起著重要的作用。
測定原理：
NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。
自備實驗用品及儀器：
天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)
樣品處理：
測定步驟和操作表：
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空白管 |
測定管 |
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樣品（μL） |
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100 |
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提取液（μL） |
100 |
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試劑一（μL） |
50 |
50 |
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試劑二（μL） |
50 |
50 |
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混勻，室溫靜置15min，于微量石英比色皿/96孔板，測定A550，ΔA=A測定-A空白 |
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NO含量計算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986
1、組織樣品：
（1）按樣本質(zhì)量計算
NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr
2、細(xì)胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）
3、其他樣品：
NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷V樣
= 125×（ΔA +0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986
1、組織樣品：
（1）按樣本重量計算
NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr
2、細(xì)胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）
NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V反總÷V樣= 250×（ΔA +0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL
掃描二維碼
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資料/datasheet
