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木質(zhì)素過氧化物酶(LiP)測試盒(比色法)
AS6321360
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產(chǎn)品詳情

木質(zhì)素過氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)試劑盒說明書

微量法100T/96S

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

木質(zhì)素過氧化物酶(EC1.11.1.14)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,屬于木質(zhì)素降解酶系,在木質(zhì)素生物降解、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)、芳香化合物轉(zhuǎn)化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應(yīng)用潛力。

測定原理

木質(zhì)素過氧化物酶催化天青脫甲基,在651nm處測定吸光值減少。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、低溫離心機、酶標儀、96孔板、可調(diào)式移液器、冰。

試劑組成和配制    

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入115mL蒸餾水,充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存一個月。

試劑二:液體5mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體5mL×1支,4℃保存。

酶液提取

  1. 組織:按照質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
  2. 細胞:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
  3. 培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測。                         

測定操作

1、酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至651nm。

2、臨用前按每個樣本試劑一:試劑二:試劑三=80:40:40(μL)的比例配制工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、在96孔板中依次加入如下試劑

 

測定管

樣品(μL)

40

工作液(μL)

160

充分混勻,立即測定651nm處10s和130s吸光值,記為A1和A2,△A=A1- A2

 

酶活計算公式

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。

LiP活性(U/mg prot)= ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。

LiP活性(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =250×ΔA÷W

3.按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義每1萬個細菌或細胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。

LiP活性(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=0.5×ΔA

4.按照液體體積計算

酶活性定義每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。

LiP活性(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =250×ΔA

V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,2min

 

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