甜菜堿（Betaine）含量試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強(qiáng)免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進(jìn)動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。
測定原理
甜菜堿在強(qiáng)酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰，測定525nm處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。
自備實驗用品及儀器
天平、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、乙醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液：液體30mL×1瓶 ，4℃保存；
試劑一：粉劑×3瓶，4℃保存；臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加20mL蒸餾水溶解，加390μL濃鹽酸調(diào)pH為1。
試劑二：99%乙醚，自備。取無水乙醚59.4mL，加入蒸餾水0.6mL，混勻。
試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。
甜菜堿提取
取烘干后過40目篩的樣品約0.02g，加0.8mL水，置于60℃提取30min，期間不斷震蕩。再加入200μL提取液，混勻后10000g，25℃，離心10min，取上清液。
測定操作表
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空白管 |
測定管 |
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上清液（μL） |
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300 |
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蒸餾水（μL） |
300 |
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試劑一（μL） |
500 |
500 |
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充分混勻，4℃中反應(yīng)2h，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清 |
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試劑二（μL） |
500 |
500 |
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混勻，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清。置于通風(fēng)櫥使殘余乙醚自然揮發(fā)干凈 |
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試劑三（μL） |
300 |
300 |
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震蕩使沉淀充分溶解，取200μL于96孔板，記錄標(biāo)準(zhǔn)管和測定管525nm處吸光值A(chǔ)測定與A空白。ΔA=A測定管-A空白管。 |
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甜菜堿含量計算公式
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057，R2 = 0.9993；x為甜菜堿濃度（mg/mL），y為吸光值。
甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷ 0.502× V標(biāo)準(zhǔn)÷(V樣÷V樣總×W)
=1.99×（ΔA-0.0057）÷W
V標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.3mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.3mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g
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資料/datasheet
