亚洲小说网,无码人妻一区二区三区免费,又大又大粗又长又硬又爽,久久婷婷人人澡人人喊人人爽,成人免费av片在线观看

您好,歡迎來到上海撫生實(shí)業(yè)有限公司!
400-990-7709 / 021-52961052(工作日9:00-18:00)
ATP含量測(cè)試盒(比色法)
AS6321126
貨號(hào) 純度 規(guī)格 目錄價(jià) 會(huì)員價(jià) 庫存 數(shù)量 購買
AS6321126-50管/24樣 50管/24樣 ¥350.00 登錄查看
AS6321126-100管/48樣 100管/48樣 ¥650.00 登錄查看
產(chǎn)品詳情

ATP含量試劑盒說明書

微量法 100管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。

測(cè)定原理:

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸含量,以此反應(yīng)ATP含量。

自備儀器和用品:

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。

試劑組成和配制:

酸性提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;

堿性提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:粉劑×1支,4℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑二:液體1.5mL×1支,4℃保存;

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入500μL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑四:液體5mL×1瓶,4℃保存;

試劑五:液體25mL×1瓶,4℃保存;

標(biāo)準(zhǔn)液:液體10mL×1瓶,2μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存;

 ATP提取

1、血清(漿)中ATP的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取約0.1mL血清(漿),加入1mL酸性提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4 ℃離心10min;取上清液至另一EP管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,8000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。

2、組織中ATP的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL酸性提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清至另一EP管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,8000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。

3、細(xì)胞或細(xì)菌中ATP的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL酸性提取液),超聲波破碎1min(冰浴,強(qiáng)度20%或200W,超聲2s,停1s),8000g 4 ℃離心10min;取上清液至另一EP管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,8000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到700nm,蒸餾水調(diào)零。

2、顯色劑的配制:臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用顯色劑體積(樣本數(shù)×0.2 m L),按試劑四(mL):試劑五(mL)=1:5的比例配制。用多少配多少。

 

3、樣本測(cè)定:

試劑名稱(μL)

測(cè)定管

對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本

10

10

 

 

標(biāo)準(zhǔn)液

 

 

10

10

試劑一

20

 

20

 

試劑二

10

10

10

10

試劑三

10

 

10

 

蒸餾水

 

30

 

30

充分混勻,37℃準(zhǔn)確水浴30min

顯色劑

200

200

200

200

37℃水浴20min后,700nm下測(cè)定各管吸光值

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管通常只需要各做一個(gè)。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

ATP含量計(jì)算:

1、血清(漿)中ATP含量計(jì)算

ATP含量(μmol/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=40×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中ATP含量計(jì)算

(1)按蛋白濃度計(jì)算

ATP含量(μmol/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr)=2×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr

蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。

(2)按樣本鮮重計(jì)算

ATP含量(μmol/g鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=4×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

ATP含量(μmol/104 cell)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)=0.008×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,2μmol/mL;V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL; W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬。

注意:最低檢測(cè)限為10nmol/mL或10nmol/g鮮重或0.1nmol/mg prot

 

 

相關(guān)產(chǎn)品
土壤多酚氧化酶(SPPO)檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品編號(hào):AS6331110 規(guī)格:96T
NADPH氧化酶(NAO)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS012149 規(guī)格:50管/24樣
土壤脲酶(UE)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS012148 規(guī)格:100管/48樣
海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS012147 規(guī)格:96T
AMP含量測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321128 規(guī)格:50管/50樣
ADP含量測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321127 規(guī)格:50管/49樣
轉(zhuǎn)氫酶2測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321137 規(guī)格:100管/96樣
轉(zhuǎn)氫酶1測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321136 規(guī)格:100管/96樣
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321135 規(guī)格:100管/48樣
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ/細(xì)胞色素C氧化酶測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321134 規(guī)格:100管/96樣
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ/CoQ細(xì)胞色素C還原酶測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321133 規(guī)格:100管/96樣
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ/琥珀酸輔酶Q還原酶測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321132 規(guī)格:100管/96樣
Ca++Mg++ ——ATP酶測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321130 規(guī)格:100管/48樣
Na+k+ ——ATP酶測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321129 規(guī)格:100管/48樣
ATP含量測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS6321126 規(guī)格:50管/24樣