羥自由基清除能力測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。
測定原理：
H2O2/ Fe2+ 通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化為Fe3+ ，導(dǎo)致536nm吸光度下降，樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。
自備實驗用品：
恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液：液體100 mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體12mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體12 mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體6mL×1瓶，4℃保存。
樣品的制備：
操作步驟：
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空白管 |
對照管 |
測定管 |
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工作液（μL） |
250 |
250 |
250 |
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混勻，防止局部顏色過濃 |
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樣品（μL） |
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50 |
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試劑四（μL） |
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50 |
50 |
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H2O（μL） |
100 |
50 |
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混勻，37℃保溫60min，8000g 25℃離心5min，吸取200μL于96孔板中測定536nm處吸光值，空白管、對照管和測定管的吸光值分別記為A空、A對和A測。 |
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注意：空白管和對照管只需測定一次。
計算公式:
羥自由基清除率 D% =（A測-A對）÷（A空-A對）×100%
A空、A對、A測：空白管、對照管和測定管的吸光值。
注意事項:
為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。
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資料/datasheet
