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銅藍(lán)蛋白（Cp）含量測試盒（比色法）
AS632163
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AS632163-100管/48樣 100管/48樣 ￥300.00 登錄查看
AS632163-50管/24樣 50管/24樣 ￥160.00 登錄查看
產(chǎn)品詳情

銅藍(lán)蛋白(Ceruloplasmin，Cp)測定試劑盒說明書

                                                  微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

銅藍(lán)蛋白是血漿的含銅蛋白，有運輸銅的功能，同時具有氧化酶的活性，是細(xì)胞外液重要的抗氧化劑。

測定原理:

銅藍(lán)蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍(lán)色產(chǎn)物，在645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍(lán)蛋白活性。

自備實驗用品及儀器:

天平、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體7mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃預(yù)熱）

樣本前處理：

  1. 血清（漿）等液體樣本：直接檢測。
  2. 動植物組織樣本：稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水，進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定操作表:

  1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至645nm，蒸餾水調(diào)零。
  2. 操作表

 

空白管

測定管

樣品（μL）

30

30

試劑一（μL）

90

90

試劑二（μL）

60

 

混勻，37℃預(yù)熱5min

試劑三（μL）

120

120

混勻，37℃反應(yīng)30min

試劑二（μL）

 

60

混勻，25℃室溫放置5min，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中，測定645nm處吸光值。

ΔA=A測定-A空白。

計算公式:

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
  1. 按體積計算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.01為一個酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.01÷V樣÷T = 33.33×ΔA

  1. 按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.01÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 33.33×ΔA÷W

  1. 按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.01÷（Cpr×V樣）÷T = 33.33×ΔA÷Cpr

 

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應(yīng)時間，30min；V樣總：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
  1. 按體積計算

酶活定義:37℃條件下， 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.005為一個酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.005÷V樣÷T = 66.66×ΔA

  1. 按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.005÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 66.66×ΔA÷W

  1. 按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.005÷（Cpr×V樣）÷T = 66.66×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應(yīng)時間，30min；V樣總：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

 

注意事項:

試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性，請操作時做好防護(hù)措施。

 

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