維生素B1（Vitamin B1，VB1）試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機體正常代謝必須的水溶性維生素，在生物體能量代謝中有重要的作用。
測定原理
VB1在堿性條件下還原鐵氰化鉀生成亞鐵氰化鉀，亞鐵氰化鉀與Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍，在704nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液：液體70mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體1mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。
試劑三：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存。
試劑五：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
樣本處理
測定操作
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空白管 |
測定管 |
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樣品（μL） |
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20 |
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試劑一（μL） |
20 |
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試劑二（μL） |
16 |
16 |
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試劑三（μL） |
20 |
20 |
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充分混勻，80℃反應10min |
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提取液（μL） |
16 |
16 |
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試劑四（μL） |
44 |
44 |
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試劑五（μL） |
24 |
24 |
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H2O（μL） |
60 |
60 |
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充分混勻，靜置20min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調(diào)零，測定704nm處吸光值，記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管。 |
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計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x為標準品濃度：μg/mL；y為△A（A測定管-A空白管）
1. 按照蛋白含量計算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr
= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V樣總）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照細胞數(shù)量計算
VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細胞數(shù)量÷V樣總）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.017
= 58.8×（△A-0.0031）
V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
b．用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x為標準品濃度：μg/mL；y為△A（A測定管-A空白管）
1. 按照蛋白含量計算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr
= 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V樣總）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照細胞數(shù)量計算
VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（細胞數(shù)量÷V樣總）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ 細胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.0085
= 117.65×（△A-0.0031）
V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項
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資料/datasheet
