淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
DBE能夠專一性地裂解支鏈淀粉的α-1，6糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調整支鏈淀粉分子的鏈長方面有重要的作用。
測定原理
采用3，5-二硝基水楊酸法測定DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過測定還原糖含量的變化來計算DBE活性。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前每支加入6mL試劑一，充分混勻后備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體35mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取
按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調零。
2、加樣表
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試劑名稱（μL） |
對照管 |
測定管 |
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95℃水浴5min后滅活的樣本 |
100 |
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粗酶液 |
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100 |
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試劑一 |
100 |
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試劑二 |
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100 |
混勻，37℃準確保溫2h
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試劑三 |
100 |
100 |
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試劑四 |
300 |
300 |
混勻，95℃水浴5min，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，540nm處讀取各管吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設個一個對照管。
注意：可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進行5min 95℃沸水浴處理。
DBE活力單位的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件測定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
（1）按照蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每h催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反總：反應體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，2 h；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件測定回歸方程為y = 1.9229x - 0.165；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
（1）按照蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每h催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.52× (ΔA+0.165) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.52× (ΔA+0.165) ÷W
V反總：反應體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，2 h；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
標準曲線線性范圍為0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA線性范圍為0.01-1。
掃描二維碼
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資料/datasheet
