血清高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol , HDL-C)試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
注意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
高密度脂蛋白為血清蛋白之一,主要由肝臟合成,運(yùn)載周圍組織中的膽固醇,再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出,是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白,是冠心病的保護(hù)因子,俗稱“血管清道夫”,對冠心病的臨床診斷是一個(gè)重要的參考指標(biāo)。
測定原理
用沉淀劑分離血清中的高密度脂蛋白膽固醇,利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇和游離脂肪酸,從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;再利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
離心機(jī),恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加5mL試劑四充分溶解。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,4℃保存。
樣品處理
取血后3小時(shí)內(nèi)分離血清,將血清樣品與試劑一按照1:1的比例充分混勻,25℃靜置15min,2000g離心15min,上清置于冰上待測。
測定操作表
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空白管
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標(biāo)準(zhǔn)管
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測定管
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蒸餾水(μL)
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4
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標(biāo)準(zhǔn)品(μL)
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4
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樣本(μL)
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4
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試劑二(μL)
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150
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150
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150
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試劑三(μL)
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50
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50
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50
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混勻,37℃靜置30min,于1mL玻璃比色皿,空白管調(diào)零,測定500nm處吸光值A(chǔ)。分別記為A標(biāo)準(zhǔn)管和A測定管
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計(jì)算公式
- 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
HDL-C含量(mmol/L)= A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×C標(biāo)準(zhǔn)管
=5×A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)管:5mmol/L
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
HDL-C含量(mmol/L)= A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×C標(biāo)準(zhǔn)管
=5×A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)管:5mmol/L
注意事項(xiàng)
- 樣本切勿反復(fù)凍融,最好在取血后12小時(shí)內(nèi)完成測定。
- 配置好的試劑三4℃保存可半個(gè)月。
- 線性范圍為0.15mmol/L-3.8mmol/L。