亚洲小说网,无码人妻一区二区三区免费,又大又大粗又长又硬又爽,久久婷婷人人澡人人喊人人爽,成人免费av片在线观看

您好,歡迎來(lái)到上海撫生實(shí)業(yè)有限公司!
400-990-7709 / 021-52961052(工作日9:00-18:00)
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)測(cè)試盒(比色法)
AS632132
貨號(hào) 純度 規(guī)格 目錄價(jià) 會(huì)員價(jià) 庫(kù)存 數(shù)量 購(gòu)買(mǎi)
AS632132-100管/96樣 100管/96樣 ¥380.00 登錄查看
AS632132-50管/48樣 50管/48樣 ¥200.00 登錄查看
產(chǎn)品詳情

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferase,GST)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                              微量法 100T/96S

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族,主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分,主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合,使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì),易于從膽汁或尿液中排泄,達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此,GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外,因?yàn)镚ST具有GSH-Px活性,亦稱(chēng)為non-Se GSH-Px,具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意,GST催化的反應(yīng)減少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

測(cè)定原理:

GST催化GSH與CDNB結(jié)合,其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm;通過(guò)測(cè)定340nm波長(zhǎng)處吸光度上升速率,即可計(jì)算出GST活性。

自備儀器和用品:

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配置:

試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體22mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加2 mL蒸餾水溶解。

粗酶液提?。?/p>

  1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
  2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3.  血清等液體:直接測(cè)定。

測(cè)定:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三放在25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)保溫。

3. 測(cè)定管:取微量石英比色皿或96孔板,加入20μL上清液,180μL試劑二和20μL試劑三,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光度變化,記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。

GST活性計(jì)算公式:

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/mg prot)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

=230×(A2-A1) ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/g 鮮重)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1)÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/104 cell)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/mL)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V樣÷T

                   = 230×(A2-A1)

ε:產(chǎn)物摩爾消光系數(shù),9.6×103 L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;106:1mol=1×106μmol;V反總:反應(yīng)體系總體積,220μL=2.2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測(cè)定,建議選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),5min。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/mg prot)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

=460×(A2-A1) ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/g 鮮重)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=460×(A2-A1)÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/104 cell)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=460×(A2-A1)÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST(nmol/min/mL)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V樣÷T

                   =460×(A2-A1)

ε:產(chǎn)物摩爾消光系數(shù),9.6×103 L/mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;106:1mol=1×106μmol;V反總:反應(yīng)體系總體積,220μL=2.2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測(cè)定,建議選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),5min。

注意事項(xiàng):

1. 樣品處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行,且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力;

2. 細(xì)胞中GST活性測(cè)定時(shí),細(xì)胞數(shù)目須在300萬(wàn)-500萬(wàn)之間,細(xì)胞中GST的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞;

3. 本法測(cè)定GST活性的線性范圍可達(dá)76 μmol/min /L,測(cè)定前先用1~2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如5min內(nèi)反應(yīng)不成線性,須對(duì)樣品用蒸餾水稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù);

4. 測(cè)定反映的溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響,請(qǐng)控制在25℃或者37℃(哺乳動(dòng)物)。

相關(guān)產(chǎn)品
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632137 規(guī)格:50管/48樣
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測(cè)定(比色法)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632136 規(guī)格:100管/96樣
γ谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632135 規(guī)格:100管/96樣
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632132 規(guī)格:100管/96樣
硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632131 規(guī)格:100管/96樣
谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632130 規(guī)格:100管/96樣
氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632129 規(guī)格:100管/96樣
還原型谷胱甘肽(GSH)測(cè)試盒(比色法)
產(chǎn)品編號(hào):AS632128 規(guī)格:100管/96樣