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30min植物基因組DNA提取試劑盒
A-PJ1169
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30min植物基因組DNA提取試劑盒

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A-PJ1169

描述:

該試劑盒采用獨(dú)特的裂解液,可快速可靠的從多糖、多酚含量較高的植物組織樣品中純化出高純度的 DNA。應(yīng)用本試劑盒提取的 DNA 可直接用于限制性酶切反應(yīng)、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):
(1) 本試劑盒中的 Washing Buffer 中已經(jīng)加乙醇,無需單獨(dú)添加。
(2)蛋白酶 K 和 Rnase A 長期保存請(qǐng)儲(chǔ)存于-20℃,短期室溫保存(6 個(gè)月),其它組分儲(chǔ)存于室溫。
(3)Plant AP2 含有 CTAB,室溫儲(chǔ)存會(huì)出現(xiàn)白色沉淀,使用前放置于 56℃水浴鍋中溶解后使用。
(4)自備試劑:氯仿。
操作方法
(1)樣本組織懸液制備研缽研磨法:在 1.5 ml EP 管中加入 600 μl 的 Plant AP1 裂解液,并在管蓋上加入 5 μl 的 Rnase A。將研磨后的植物組織(干重 40~60 mg,濕重 150 mg)加入到 Plant AP1 裂解液中,漩渦震蕩混合 15s。鋼珠研磨法:在研磨 EP 管中加入 700 μl 的 Plant AP1 裂解液,加入植物組織(干重 50~80 mg,濕重 200 mg),并加入鋼珠進(jìn)行研磨,研磨完畢后,取 600 μl 的組織懸液到新的
1.5 ml EP 管中,并在管蓋上加入 5 μl 的 Rnase A。
(2)向上述組織懸液中加入 250 μl Plant AP2 裂解液,漩渦混合 15s,56℃水浴鍋(或室溫)靜置 5min,以消化 RNA。
(3)向上述溶液中加入 20 μl 蛋白酶 K,漩渦混合 10s,于56℃水浴鍋(或室溫)中消化 5~15min。
(4)13,000rpm 離心 5min,吸取 600 μl 上清到新的 1.5mlEP 管中,并加入 500μl 的氯仿,漩渦混合 15s。
(5)13,000rpm 離心 2min,溶液將分為無色上層水相DNA)、中間層(蛋白)和綠色下層油相(酚類)。
(6)吸取 400 μl 上層無色上清液到新的 1.5 ml EP 管中,并加入 450 μl 的 Plant LB3 溶液,漩渦 10s 后,倒入到吸附柱中,13,000rpm 離心 1min。
(7)倒掉廢液。向吸附柱中加入 500 μl Washing Buffer,13,000rpm 離心 15s。重復(fù)此步驟一次。
(8)將吸附柱重新放回離心機(jī),13000rpm 空離心 2min,將殘留的乙醇徹底甩干。
(9)將吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 60~150 μl DNA Elution Buffer,室溫放置 1min,13,000rpm 離心 1min,洗脫液即為基因組 DNA,冷凍保存。

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