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5min極速RNA提取試劑盒
A-PJ1070
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5min極速RNA提取試劑盒 

50T

A-PJ1070

描述:

本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液,可快速可靠的從細(xì)胞、動(dòng)物組織、植物組織、病毒液樣本、抗凝全血、培養(yǎng)細(xì)菌中純化出高純度的總 RNA。該試劑盒是目前國際上操作步驟最少、用時(shí)最短的 RNA 提取試劑盒(最快 5 分鐘)。應(yīng)用本試劑盒提取的 RNA 可直接用于反轉(zhuǎn)錄、基因克隆、定量檢測(cè)、文庫構(gòu)建、雜交等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):
(1) 本試劑盒中的 Washing Buffer 中已經(jīng)加乙醇,無需單獨(dú)添加。
(2) RNA LB1 和 RNA BB2 均具有腐蝕性,注意防護(hù)。操作方法
(1)裂解/上柱(1.5ml EP 管中處理)培養(yǎng)細(xì)胞:胰酶消化完畢后,離心收集細(xì)胞沉淀,用 20~30μl 水或PBS 重懸細(xì)胞沉淀(務(wù)必重懸充分)。加入 120μl RNA LB1 漩渦混勻 30s(有未溶解的細(xì)胞團(tuán)塊,用槍頭吹打,助溶解),加入 500μlRNA BB2 上下顛倒混合均勻,倒入吸附柱中。13000rpm 離心 30s,倒掉廢液,進(jìn)行后續(xù)洗滌/洗脫步驟。
組織樣品----采用研缽進(jìn)行研磨:用液氮研磨粉碎組織樣本,將研磨粉碎的樣品加入到 200μl RNA LB1 中,漩渦混合均勻 1min(有塊狀組織未溶解的,要使用槍頭吹打,助消化),加入 500μl RNABB2 上下顛倒混合均勻,13000rpm 離心 15s。將上清倒入吸附柱中(動(dòng)作需輕柔,勿將未消化的組織塊倒入吸附柱),13000rpm 離心 30s,倒掉廢液,進(jìn)行后續(xù)洗滌/洗脫步驟。
組織樣品----采用鋼珠進(jìn)行研磨:將組織樣品加入到 300μl RNALB1 中(1.5ml EP 管),并加入幾粒鋼珠,置于組織研磨儀中,研磨 1~2min。向研磨后的勻漿液中加入 750μl RNA BB2,漩渦混勻5s,13000rpm 離心 1min。用 1ml 吸頭吸取 750μl 上清液到吸附柱中。13000rpm 離心 30s,倒掉廢液,進(jìn)行后續(xù)洗滌/洗脫步驟。注意:植物組織的勻漿效果通常較動(dòng)物組織差一些,所以一般推薦采用液氮條件下研缽來研磨。在采用鋼珠研磨的條件下務(wù)必將組織研磨粉碎,否則會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)率降低。病毒液 /體液 /血清 /血漿:吸取 150μl 病毒液/體液樣品到加入到120μl RNA LB1 中,漩渦混合均勻 30s。直接加入 500μl RNA BB2中,漩渦混合均勻 15s。倒入吸附柱中,13000rpm 離心 30s,倒掉廢液,進(jìn)行后續(xù)洗滌/洗脫步驟。
培養(yǎng)細(xì)菌:收集菌體后,用 20~30μl 水重懸菌體(務(wù)必重懸充分),加入 120μl RNA LB1 漩渦混勻 30s,加入 500μl RNA BB2 上下顛倒混合均勻,倒入吸附柱中。13000rpm 離心 30s,倒掉廢液,進(jìn)行后續(xù)洗滌/洗脫步驟。
(2) 洗滌和洗脫
向吸附柱中加入 500μl Washing Buffer,13000rpm 離心 15s。重復(fù)此步驟一次。 將吸附柱重新放回離心機(jī),13000rpm 空離心1min,將殘留的乙醇徹底甩干。 將吸附柱芯放入到 2mL NucleaseFree 收集管中,向吸附柱芯中加入 20~50μl Nuclease Free H2O,室溫放置 1min,13,000rpm 離心 1min,洗脫液即為提取的 RNA,冷凍保存。

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