土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）
試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
S-LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關。
測定原理：
S-LAP分解L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算S-LAP活性。
自備用品：
酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體35mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
S-LAP測定步驟：
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試劑名稱 |
對照管 |
測定管 |
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新鮮土樣（g） |
0.05 |
0.05 |
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試劑一（μL） |
300 |
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試劑二（μL） |
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300 |
混勻， 37℃振蕩反應1h后，8000g 4℃離心10min，取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，405nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。
S-LAP活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
單位的定義：每天每g土樣每天生成1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA
V反總：反應體系總體積，3×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應時間，1h=1/24d； W：樣本質量，0.05g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
單位的定義：每天每g土樣每天生成1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA
V反總：反應體系總體積，3×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；T：反應時間，1h=1/24d； W：樣本質量，0.05g。
掃描二維碼
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資料/datasheet
