土壤芳基硫酸酯酶（Solid-aryl sulfatase，S-ASF）試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
土壤芳基硫酸酯酶來自于土壤微生物，能酶促土壤有機(jī)硫化物轉(zhuǎn)化為植物可吸收的無機(jī)態(tài)硫，在硫素的生物化學(xué)循環(huán)和植物的硫營(yíng)養(yǎng)代謝中具有重要的作用，是反映土壤質(zhì)量的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo)。
測(cè)定原理：
S-ASF能夠催化對(duì)-硝基苯硫酸鉀生成對(duì)-硝基苯酚，后者在410nm有特征光吸收。
自備用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存（自備）；
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入1.25mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：液體20mL×1瓶，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
測(cè)定步驟：
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試劑名稱 |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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風(fēng)干土樣（g） |
0.05 |
0.05 |
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試劑一（μL） |
12.5 |
12.5 |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn)，室溫放置15min
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試劑二（μL） |
200 |
200 |
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試劑三（μL） |
50 |
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蒸餾水（μL） |
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50 |
混勻， 37℃水浴1h后
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試劑四（μL） |
50 |
50 |
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試劑五（μL） |
200 |
200 |
充分混勻，室溫靜置2min后，10000g 25℃離心10min，取200μL上清液于410nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-ASF活力計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0066x -0.013；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-ASF活力（μmol/d /g 土樣）＝ (ΔA+0.013) ÷0.0066×V反總÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013)
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V反總：反應(yīng)體系總體積：2.625×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0033x -0.013；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-ASF活力（μmol/d /g 土樣）＝ (ΔA+0.013) ÷0.0033×V反總÷W÷T =38.19×(ΔA+0.013)
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積：2.625×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
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