土壤淀粉酶（Soil Amylase，S-AL）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/48S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
淀粉酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一類(lèi)酶的總稱(chēng)。土壤中的淀粉酶主要來(lái)自于微生物，是一種重要的酶制劑，廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。
測(cè)定原理
淀粉酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖，可與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在508nm處有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。
需自備的儀器和用品
天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。
試劑的組成和配制
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體4mL×1瓶，4℃保存。若出現(xiàn)沉淀析出，需70℃加熱溶解后再用。
試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保存。
測(cè)定操作表
|
|
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
|
土樣（g） |
0.02 |
0.02 |
|
甲苯（μL） |
10 |
10 |
|
25℃靜置15min |
||
|
試劑一（μL） |
110 |
50 |
|
試劑二（μL） |
|
60 |
|
充分混勻，37℃震蕩1h，8000rpm，25℃，離心10min |
||
|
上清液（μL） |
100 |
100 |
|
試劑三（μL） |
100 |
100 |
|
充分混勻，90℃水浴5min，待冷卻后，于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定508nm吸光值，分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。 |
||
計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2525x - 0.034，R2 = 0.9917
酶活單位定義：每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL（mg/d /g 鮮重）=（△A +0.034）÷ 0.2525×V反總÷W÷T
= 10.464×（△A +0.034）÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.11mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d；W：樣本質(zhì)量，g。
b．用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1263x - 0.034，R2 = 0.9917
酶活單位定義：每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL（mg/d/g）=（△A +0.034）÷ 0.1263×V反總÷W÷T
=20.928×（△A +0.034）÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.11mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d； W：樣本質(zhì)量，g。
掃描二維碼
掃描二維碼 撫生公眾號(hào) |
 客服-夏菊花 |
 客服-陳筱筱 |
 客服-李瑞瑞 |
可可.jpg) 客服-郭笑笑 |
 客服-李爽 |
客服-林燕 |
資料/datasheet