PCR實驗室最容易忽視的環(huán)節(jié),對試驗輔料進行質(zhì)檢。PCR實驗室的輔料指的是PCR實驗中常用的一些輔助試劑和耗材,比如采樣管、拭子、離心管、PCR管、吸頭、移液器、無核酸酶水和試管架等。
PCR管是用于聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)實驗的容器,常見的種類包括單管、8聯(lián)管、12聯(lián)管等。這些管子根據(jù)實驗需求和PCR儀的適配性來選擇,比如單管適合少量樣本檢測,8聯(lián)管是最常用的選擇,而12聯(lián)管則提供了更高的靈活性和性價比。PCR管的體積有0.1ml和0.2ml兩種,其中0.1ml管由于死體積小、減少水蒸氣影響、降低掛壁冷凝水以及提高熒光捕獲率,通常能提供更好的擴增結(jié)果和實驗穩(wěn)定性。
PCR管的分類:
1. 單管:適用于單個或少量樣本的檢測。
2. 8聯(lián)管:最常用,操作便利,每個管有獨立蓋子。
3. 連蓋8聯(lián)管:每個管獨立連蓋,避免操作污染,方便加樣。
4. 12聯(lián)管:操作靈活,性價比優(yōu)于8聯(lián)管。
PCR管性能檢測:
(1)滲漏密閉性:將n個PCR管加入半量墨汁,蓋好蓋子后放入水中,浸泡30min,沒有墨汁滲出為合格。
(2)離心密閉性:將n個PCR管加入半量純水,放入離心機,1000 rpm,30min,管蓋未崩開未漏液為合格。
(3)熱密閉性:將n個PCR管加入半量純水,蓋好蓋子稱重后放入PCR儀,設(shè)置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,再進行稱重,PCR管未變形,管蓋未崩開未漏液,前后重量未變化為合格。。
(4)冷密閉性:將n個PCR管加入半量純水,放入-20℃冰箱,24h,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液為合格。
(5)污染物質(zhì)檢:將n個PCR管加入半量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。
(6)抑制物質(zhì)檢:將n個PCR管分別加入弱陽性質(zhì)控物,室溫靜置5min,然后進行提取;RNA核酸,DNA核酸,室溫靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。
(7)空白熒光通透性:對于qPCR,需要考察PCR管是否有非特異性熒光信號,將n個空PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀,設(shè)置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,qPCR無擴增為合格。
(8)陽性熒光通透性:對于qPCR,還需要考察PCR管是否會抑制熒光的通透性,將n個含弱陽性樣品和擴增試劑的PCR管,與確認無熒光干擾的PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀一同擴增,設(shè)置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,qPCR擴增未被抑制為合格。